生物活性

GSK126是高活性，S-腺苷-蛋氨酸竞争性EZH2甲基转移酶抑制剂，Ki为0.5 nM

体外研究

GSK126 可有效抑制野生型和突变型 EZH2 甲基转移酶活性，且效力相似 (Ki=0.5-3 nM)，与所用底物无关，并且与 S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 具有竞争性，与肽底物无竞争性。GSK126 对其他甲基转移酶和多种其他蛋白质类别 (EZH1，IC50=680 nM) 具有高度选择性[1]。用 GSK126 处理三种 SCLC 细胞系可诱导生长抑制。用 0.5、2 和 8 μM GSK126 处理 SCLC 细胞系 (Lu130、H209 和 DMS53)，并通过 WST-8 测定分析生长曲线。在所有三种细胞系中，8 μM 浓度的 GSK126 处理均会抑制细胞生长，而 Lu130 和 H209 对 GSK126 更敏感，即使在较低剂量下也是如此

体内研究

在负荷KARPAS-422和Pfeiffer异种移植物的小鼠体内，GSK126 (150 mg/kg/d, i.p.)降低总体H3K27me3，增加基因表达，从而引起显著的肿瘤消退

激酶实验

制备包含野生型或突变型EZH2的5个组分的PRC2复合物(Flag–EZH2，EED，SUZ12，AEBP2，RbAp48)。GSK126在DMSO中溶解，以0.6 nM到300 nM的浓度测试，终DMSO浓度为2.5%。体外实验中，相对于更倾向H3K27me0作为底物的野生型EZH2，EZH2 Y641倾向于H3K27me2作为底物，而对H3K27me0 或H3K27me1的活性很低。A677G不同于EZH2的野生型和Y641突变型，它有效地使H3K27me0，H3K27me1，和H3K27me2甲基化；因此，组蛋白H3多肽(残基21–44；终浓度10 μM)与 K27me0 (野生型，A677G EZH2)，K27me1 (A677G EZH2)，或K27me2 (A677G，Y641N，Y641C，Y641H，Y641S 和 Y641F EZH2)用作甲基转移酶底物。GSK126加入到板中，然后加入6 nM EZH2复合物和多肽。GSK126的效能处于或接近[SAM] = Km下进行的试验的紧密结合界限，IC50值在竞争性底物SMA相对其Km(7.5 μM SAM，而 SAM Km为0.3 μM)较高浓度下测量。在这些条件下，酶浓度的作用相对非常小，可以计算出Ki的精确估计值。反应通过[³H]-SAM起始，培养30分钟，加入500倍过量未标记的SAM淬灭反应，甲基化产物肽在磷酸纤维素过滤器上根据供应商提供的MSPH 多屏幕平板进行捕获。表观Ki值使用竞争性抑制剂的Cheng–Prusoff关系计算。IC50=Ki (1+[S]/Km)+[E]/2，其中E是酶，S为底物

细胞实验

动物实验

不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南）

例如，已知某工具药用于小鼠的剂量为88 mg/kg , 则用于大鼠的剂量换算方法：将88 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到该药物用于大鼠的等效剂量44 mg/kg。

参考文献

1.EZH2 inhibition as a therapeutic strategy for lymphoma with EZH2-activating mutations.Nature.2012 Dec 6;492(7427):108-12.
2.A687V EZH2 is a driver of histone H3 lysine 27 (H3K27) hypertrimethylation.Nature.2014 Dec;13(12):3062-73.
3.Identification of coexistence of DNA methylation and H3K27me3 specifically in cancer cells as a promising target for epigenetic therapy.Nature.2015 Feb;36(2):192-201.

体内溶解度

Clinical Trial Information ( data from http://clinicaltrials.gov )

注：以上所有数据均来自公开文献，并不保证对所有实验均有效，数据仅供参考。

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