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产品描述
Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。WST-8是MTT的一种升级替代产品，和爱他四唑盐MTT、XTT、MTS或WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测非常便捷，无毒安全，无放射性，性价比高，是一支即开即用的已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液。无需任何配制，无需使用同位素，适用于大批量的样品检测。
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保存条件
4 ℃密封干燥避光保存1年，-20 ℃干燥避光保存2年。
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操作步骤
一. 制作标准曲线（测定细胞具体数量）
二. 细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液（100 μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃，5% CO2）。
2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
三. 细胞增殖-毒性检测
1、在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2、向培养板中加入10 μL不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
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注意事项
1. 使用前请充分混匀，避免反复冻融。
2.加入CCK-8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。
3在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。
4.用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
5.检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。
6.如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
注：以上所有数据均来自公开文献，并不保证对所有实验均有效，数据仅供参考。
